【摘要】 目的 建立測定益肝靈片中水飛薊賓含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為Dikma Diamonsid C18柱，甲醇��1%冰醋酸(體積比49∶51)為流動相，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長288 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果 水飛薊賓的質(zhì)量濃度在20.68～82.72 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.999 9;平均回收率為97.5%，RSD為2.8%。結(jié)論 本文方法簡便、快速、準(zhǔn)確可靠，可用于益肝靈片的質(zhì)量控制。

　　【關(guān)鍵詞】 益肝靈片,水飛薊賓,高效液相色譜法 ,醫(yī)學(xué)論文發(fā)表

　　益肝靈片為保肝藥，主要成分為水飛薊素，屬于黃酮類化合物，由水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊丁3種同分異構(gòu)體組成。現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法，以水飛薊賓計算益肝靈片中水飛薊素的含量，測定結(jié)果是水飛薊素(總黃酮)的含量，結(jié)果受顏色變化等因素影響較大，并不能準(zhǔn)確測定水飛薊賓的含量。為進(jìn)一步評價益肝靈片的質(zhì)量，本文建立了益肝靈片中水飛薊賓含量測定的高效液相色譜法，并與紫外分光光度法進(jìn)行比較。本文方法具有分離效果好、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。醫(yī)學(xué)論文發(fā)表期刊《中國保健》雜志是中華人民共和國衛(wèi)生部主管，全國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)企業(yè)管理協(xié)會主辦,旬刊全年36期，大16開本。國際刊號：ISSN1005-2720，國內(nèi)刊號：CN11-3377/R，郵發(fā)代號：82-618(國內(nèi))，4510M(國外)。本刊以科學(xué)性、學(xué)術(shù)性和實用性為辦刊宗旨，力求及時、準(zhǔn)確地反映國內(nèi)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究、臨床研究、預(yù)防醫(yī)學(xué)研究、藥學(xué)研究中的新成果、新方法、新理論、新動態(tài)。用醫(yī)學(xué)的科學(xué)理論和臨床技術(shù)指導(dǎo)醫(yī)務(wù)工作者的醫(yī)療服務(wù)實踐，為廣大醫(yī)務(wù)工作者提供良好的教育機(jī)會和學(xué)術(shù)交流的平臺，致力于全面提高醫(yī)師的綜合素質(zhì)。為醫(yī)生評職、考核、晉級提供重要依據(jù)。

　　1 儀器與試藥

　　DIONEX高效液相色譜儀(戴安公司)，UVD170U型可變波長檢測器,P680A四元梯度泵, Chromeleon化學(xué)工作站;紫外分光光度計(日立U3210);SK7200H型超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器廠)，工作頻率59 kHz，輸出功率350 W。

　　水飛薊賓對照品(中國藥品生物制品檢定所，0856-200203)，益肝靈片(廣州白云山制藥總廠，批號：4050001，4060001，070303，規(guī)格：38.5 mg/片)。甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為高純水。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 溶液的制備

　　2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取105 ℃干燥3 h后的水飛薊賓對照品約10.34 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液(質(zhì)量濃度為206.8 μg·mL-1)。

　　2.1.2 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于水飛薊賓10 mg)，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;精密吸取上清液5 mL至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，作為供試品溶液。

　　2.1.3 陰性對照液的制備 根據(jù)處方配制陰性對照品，按“2.1.2”項方法處理得陰性對照液。

　　2.2 測定方法 由于水飛薊賓對照品和供試品中都同時含有水飛薊賓和異水飛薊賓，因此按外標(biāo)法以水飛薊賓與異水飛薊賓峰面積之和計算。

　　2.3 方法學(xué)考察

　　2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別吸取一定量的水飛薊賓對照品貯備液，加甲醇稀釋成水飛薊賓質(zhì)量濃度為20.68、31.02、41.36、51.70、62.04、82.72 μg·mL-1的溶液。依次進(jìn)樣20 μL，每個濃度測定3次以上。以峰面積(A)對對照品溶液質(zhì)量濃度(ρ)進(jìn)行回歸，得水飛薊賓回歸方程為A =667.95ρ+0.11，r=0.999 9。表明水飛薊賓質(zhì)量濃度在20.68～82.72 μg·mL-1之間與峰面積線性關(guān)系良好。

　　2.3.2 精密度試驗 取質(zhì)量濃度為41.36 μg·mL-1的水飛薊賓對照品溶液20 μL，連續(xù)測定5次，其峰面積的RSD值為2.0%，表明儀器精密度良好。

　　2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液(批號：070303)在0、2、4、6、8、12、24 h 分別進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為1.1%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

　　2.3.4 重復(fù)性試驗 取同一批號(批號：070303)樣品6份，照“2.1.2”方法處理并測定，結(jié)果水飛薊賓平均含量為 6.45 μg·mL-1，RSD為1.5%，表明分析方法精密度良好。

　　2.4.5 加樣回收試驗 精密稱取同一批號樣品(批號：070303)共6份，精密加入水飛薊賓對照品，照“2.1.2”方法處理并測定，計算回收率，結(jié)果水飛薊賓平均回收率為97.5%，RSD為2.8%，表明本方法準(zhǔn)確可靠，見表1。表1 水飛薊賓回收率試驗結(jié)果 本文由教育大論文下載中心WwW.JiaoYuDa.CoM整理

　　2.4 樣品測定

　　取益肝靈片3批，照“2.1.2”方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液(12 μg·mL-1)與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中水飛薊賓的含量，結(jié)果見表2。表2 樣品中水飛薊賓測定結(jié)果

　　3 討 論

　　3.1 最大吸收波長的選擇

　　取對照品溶液在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在288 nm處有最大吸收，故確定檢測波長為288 nm，見圖2。

　　3.2 流動相的選擇

　　曾試用甲醇��0.05 moL/L磷酸二氫鉀溶液(0.2 moL/L磷酸調(diào)節(jié)pH值4.0)[3]、甲醇��0.02%冰醋酸溶液[4]和甲醇��1%冰醋酸溶液[5]為流動相，并比較不同比例流動相對分離的影響，結(jié)果以甲醇��1%冰醋酸溶液(體積比49∶51)為流動相時的峰形較好，分離度較高。

　　3.3 提取時間的考察

　　考察超聲提取10、15、20、25、30 min對提取率的影響，結(jié)果表明，超聲提取20 min含量達(dá)穩(wěn)定，時間增加，含量不會增加。因此選擇甲醇為溶劑，超聲提取20 min。

　　3.4 2種含量測定方法比較

　　理論含量根據(jù)原料水飛薊素的含量和理論投料量計算得出。原料水飛薊素的含量測定方法包括紫外分光光度法測定水飛薊素(總黃酮)含量，結(jié)果以水飛薊賓計算，不得少于68%;以及高效液相色譜法測定水飛薊賓的含量，結(jié)果含水飛薊賓和異水飛薊賓不得少于30%。2種方法測定結(jié)果比較可見，紫外分光光度法測定益肝靈片中水飛薊素以水飛薊賓計，實際是測定總黃酮的量，結(jié)果容易受到各種因素影響而出現(xiàn)偏差，相比之下，采用HPLC法對益肝靈片中水飛薊賓進(jìn)行含量測定的結(jié)果更準(zhǔn)確。見表3。表3 2種含量測定方法結(jié)果比較 批號紫外分光光度法測定含量理論含量HPLC法測定含量理論含量405000138.538.516.517.0406000142.438.517.717.607030337.338.516.816.5