在全球公共衛生問題中，慢性傳染性疾病結核病的形勢是異常嚴峻和迫切的，我國的結核病疫情更顯嚴重，屬全球22個結核病高負擔國家之一，結核病的患病人數在全球僅次于印度居第二位。現今結核病仍然是世界衛生組織(WHO)和我國重點防治的重大傳染性疾病之一。2012年發病率在各種傳染病發病率中排第二位[1]。

　　摘要:目的：探討基于γ-干擾素釋放的T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)在結核病診斷中的意義。方法：首先對2013年1月-12月間在我院住院的肺結核病人30例，結核性胸膜炎30例，結核性腦膜炎9例進行T-SPOT.TB檢測，并分別對他們的血清、胸腔積液和腦脊液進行腺苷脫氨酶(ADA)檢測，在某醫院職工進行年底查體時，采用T-SPOT.TB對他們進行檢測，對他們的血清進行ADA檢測，在保密個人信息的前提下，調查所有進行T- SPOT試驗的職工的健康狀況。結果：肺結核病人30例，T-SPOT.TB陽性30例,ADA陽性25例，結核性胸膜炎30例，T-SPOT.TB陽性 30例，ADA陽性27例，結核性腦膜炎9例，T-SPOT.TB陽性9例，ADA陽性5例。某醫院共有420名工作人員查體，做T-SPOT試驗的共 291人，陽性54人，陽性率為18.6%，陰性237人，經調查及詢問本人發現，54人中有3人曾先后患肺結核并治療，現已治愈停藥。其他51人皆無癥狀(如：午后低熱，盜汗等)、無體征(如：胸部X光片無病變，包括鈣化灶、無胸腔積液)、內科、外科檢查無淋巴結腫大，無關節腫大、疼痛等，基本排除活動性結核病。結論：T-SPOT.TB作為結核菌感染檢測的最為準確的方法之一，敏感性極高，各種結核病病人都表現陽性，而感染過結核菌未發病的人一般也都表現為實驗陽性，由此可見：T-SPOT.TB陽性對結核病的診斷具有強大的支持作用，但存在一定的假陽性，而通過ADA陽性診斷結核病存在一定的假陰性，兩者聯合，能明顯提高陽性率和特異性;但T-SPOT.TB檢測陰性，基本可排除結核病(HIV病人除外)[1]，對結核病的排除具有十分重要的意義。

　　關鍵詞：職稱論文發表價格,T-SPOT.TB,結核病,陰性排除

　　TO investigate the Clinical significance of T-SPOT.TB assay in thediagnosis of Tuberculosis

　　Objective: To investigate the significance thatT-SPOT.TB assay based on the release of interferongamma in the diagnosis of tuberculosis.

　　Methods :First, Random select 30 Pulmonary tuberculosis cases,30 Tuberculous pleurisy cases and 9Tuberculous meningitis cases inpatient during 2013 Jan. to 2013 Dec. using T-SPOT.TB and ADA to detect them . When one hospital staffs check their bodies, in the case of informed consent, using T-SPOT.TB to detect them .Then survey their health status and pledge myself to a top secret. At the same time using T-SPOT.TB to detect 30 patients that been diagnosed and are receiving treatment for tuberculosis.

　　Results: T-SPOT.TB Positive numbers are:30 cases, 30 cases, 9 cases. ADA Positive numbers are 25 cases, 27 cases, 5 cases, There are 420 hospital staffs that check their bodies this time, andin the experiment of a total of 291 people, There are 54 people was positive, the positive rate was 18.6%, There are 237 people was negative. In fact, there are 3 people in 54 people had been suffered from tuberculosis and have now been cured. The other 51 people had no symptoms (such as: afternoon fever, night sweats), no signs (such as: no lesions after X ray chest, including calcification，no pleural effusion) , surgical, medical examination no lymph node swelling, no joint swelling or pain, Say in another way, the 51 people are ruled out active tuberculosis. At the same time using T-SPOT.TB to detect 30 patients that were suffered from tuberculosis and are receiving treatment, all the 30 cases were positive.

　　Conclusion: T-SPOT.TB is one of the most accurate methods for detecting latent TB infection, it is high sensitivity. People infected with TB are usually manifested positive, Whether or not he has TB disease at that time. T-SPOT.TB test is negative have very important meanings for eliminating TB: T-SPOT.TB test was negative can exclude tuberculosis

　　Key words:T-SPOT.TB，tuberculosis， negative test can exclude the disease

　　痰涂片和或/培養陽性是結核病診斷的金標準，但涂片法敏感性低，約30%陽性率，培養法陽性率稍高，但時間長，需3-8周，不利于早期發現結核病及控制傳染源。我們本著早發現，早治療的原則，想尋找一種能做出快速診斷的方法，采用結核分枝桿菌感染T細胞斑點實驗(T-SPOT.TB)，根據斑點形成數量檢測各種結核病的病人及醫院全體職工(有部分職工因時間關系未做此項檢測)外周血特異性T細胞，以探討該技術在結核病診斷中的應用價值及意義。

　　1.資料和方法

　　1.1 研究對象一組為隨機選取2013年1月-12月間在我院住院的肺結核病人30例，結核性胸膜炎30例，結核性腦膜炎9例，先進行T-SPOT.TB檢測和血清、胸腔積液及腦脊液的ADA檢測;第二組為某醫院在職并進行健康查體職工，包括各臨床科室的醫生、護士，各醫技科室工作人員，行政及后勤科室的工作人員，男100人，女191人，共291人。

　　1.2 方法

　　1.2.1樣本采集69例在院病人，由醫生先與病人溝通，在病人同意后由護士在病人做其他血液檢驗時多抽一管肝素鋰抗凝血5ml，顛倒混勻，備用。結核性胸膜炎30例，在為病人抽取胸腔積液進行檢驗時多留一管進行ADA檢測，結核性腦膜炎9例，在為病人抽取腦脊液進行檢驗時多留一管進行ADA檢測;在某醫院工作人員查體時，采集生化血液之后，采集靜脈血5ml于含有肝素鋰抗凝劑的試管中，立即顛倒混勻5-8次，備用。

　　1.2.2酶聯免疫斑點試驗按照T-SPOT.TB(英國Oxford Immunotec Ltd生產，上海信長有限公司代理)試劑盒的說明書進行操作，采用密度梯度法離心提取單個核細胞(PBMC)，并計數單個核細胞濃度，用細胞培養液調節細胞濃度至2.5*109/L，在已包被抗IFN.7抗體微量板的4個孔中，分別加入細胞培養液作為陰性對照，植物血球凝集素(PHA)作為陽性對照,結核桿菌特異混合多肽A和B分別含EsAT.6和CFP.10(Oxford Immunotec Ltd,Oxford UK)。然后在每個孔中加入100?l上述細胞懸液，輕輕混勻。把微量板放在37℃培養16-20小時后，用PBS洗板4次，加入堿性磷酸酶標記的小鼠抗人IFN.7單克隆抗體，輕輕混勻，在2-8℃下孵育1小時。取出用PBS洗滌4次。最后每孔加入顯色底物液BCIP/NBTPLUS,室溫靜置7分鐘后觀察結果，并在放大鏡(或顯微鏡)下進行斑點計數。

　　1.2.3結果判斷根據試劑盒使用說明判斷結果：如果陰性對照孔SFC為0-5，則測試孔SFC-陰性對照孔SFC≥6視為陽性，如果陰性對照孔SFC≥6,則測試孔SFC≥2倍陰性對照孔SFC視為陽性。

　　1.2.4ADA 的檢測是用美國貝克曼公司生產的儀器DXC800和原裝進口試劑進行測定，以血清ADA>25,胸腔積液ADA>40，腦脊液ADA>10為陽性。

　　1.3統計學方法采用X2檢驗計算組間差異，P<0.05為差異具有統計學意義。

　　2結果

　　2.1第一組在院病人組全血T-SPOT.TB測定結果及對應標本ADA結果比較見表1：

　　T-SPOT.TB法和ADA法比較，肺結核組 X2=5.45，P<0.05，結核性胸膜炎組X2=3.15，P>0.05,結核性腦膜炎組X2=5.1，P<0.05。由此可見，對于肺結核和腦膜炎的診斷，T-SPOT.TB法的陽性符合率要明顯高于ADA法，差別有統計學意義;而對于結核性胸膜炎的診斷，T-SPOT.TB法和胸腔積液的ADA法比較，差異無統計學意義。把各組綜合起來，都看做結核病，T-SPOT.TB法和ADA法比較X2=10.78，P<0.05，差別有統計學意義。

　　查體組各科室全血T-SPOT.TB測定結果見表2：

　　呼吸科病房與其他病房科室比較，X2=1.66，P>0.05，差異無統計學意義;呼吸科病房與醫技科室比較，X2=0.76，P> 0.05，差異無統計學意義;呼吸科與后勤科室比較，X2=5.29，P <0.05，差異有統計學意義;其他病房科室與醫技科室比較，X2=0.21，P>0.05，差異無統計學意義;其他病房科室與后勤科室比較，X2=2.10，P>0.05，差異無統計學意義;醫技科室與后勤科室比較，X2=2.15，P>0.05，差異無統計學意義。查體的 291人中有54例陽性，陽性率為18.6%，與王森、路麗蘋報告的結核病人密切接觸者的陽性率19.1%、22.22%相近[2][3]，陰性237 人。經調查及詢問本人發現，54人中有3人曾先后患肺結核并治療，現已治愈停藥，3人分別分布于呼吸科、其他病房科室、后勤科室,分布無集中現象。其他 51人皆無癥狀(如：咳嗽、午后低熱，盜汗等)、無體征(如：胸部X光片無病變，包括鈣化灶、無胸腔積液)、內科、外科檢查無淋巴結腫大，無關節腫大、疼痛等，基本排除活動性結核病;T-SPOT.TB檢測陰性的237人，經調查體檢結果，皆無患結核病。

　　查體組T-SPOT.TB陽性人員進行同期血清ADA檢測結果見表3：

　　X2=108，P <0.05，差異有統計學意義。

　　3 結論

　　我們利用循證醫學的方法，對各組人群進行了T-SPOT.TB和ADA的檢測，只有結核性胸膜炎組的全血T-SPOT.TB檢測和胸腔積液的ADA檢測陽性符合率差別無統計學意義，其他情況T-SPOT.TB檢測的陽性符合率都高于ADA檢測，差別有統計學意義。T-SPOT.TB作為結核菌感染檢測的最為準確的方法之一，敏感性極高[4]，凡是患病者試驗結果皆為陽性:72/72，包括治愈的和現病人，陽性率為100%，感染過結核菌而現今未發病的人檢測結果也呈陽性，雖然他現在未發病，本研究51例。因此單純T-SPOT.TB檢測陽性作為“結核病”的診斷有一定的假陽性，單純ADA檢測陽性作為 “結核病”的診斷有一定的假陰性，臨床醫生應兩者結合或結合其它檢查來確診結核病;但T-SPOT.TB檢測陰性對結核病的排除具有十分重要的意義。

　　醫院中的工作人員，比起社區中普通居民而言，有更多的機會接觸到肺結核病人，即有更高的幾率感染結核菌，特別是呼吸科的工作人員[5]。其患病率(3/291)比社區中居民的患病率(459/10萬)也高[1]。因此，在日常的工作中，進行標準預防的基礎上，還應加強呼吸道防護，扎實搞好醫院感染管理。

　　4 討論

　　呼吸道疾病的種類本來就多，種種原因引起的霧霾天氣天數增加等因素引起了更多呼吸道疾病的發病，眾多的呼吸道疾病在臨床的診治過程中往往都要與肺結核進行鑒別診斷，由于卡介苗的普遍接種，病人的癥狀及X線等影像學表現有時不那么典型，病原體診斷的陽性率低，陽性率稍高些的實驗又費時，因此，建立更加快速、準確的診斷方法對于早期發現和及早治療結核病至關重要。近年，T-SPOT.TB檢測等方法相繼應用于臨床，其敏感性大大提高。本組研究資料證實，結核病人的T-SPOT.TB檢測結果100%呈陽性反應，但T-SPOT.TB檢測結果陽性的并不全部是病人，有相當一部分是感染過結核菌而并未發病的健康人和已經治愈的健康人，因此，T-SPOT.TB檢測結果陽性支持結核病但不能診斷結核病，要結合其他的檢查來綜合診斷，結合ADA的檢測即是一個不錯的選擇;但T-SPOT.TB檢測結果陰性對于排除活動性肺結核具有十分良好的敏感性和特異性，可以廣泛應用于呼吸道疾病的鑒別診斷中[6][7]。

　　在我院的生殖科(特別是不孕不育科)及骨關節病科，自身免疫性疾病科等科室已廣泛利用T- SPOT.TB試驗來代替結核菌素試驗，作為結核病的排除試驗，結束了往日結核菌素實驗因受卡介苗接種的影響而結果臨界值很難判斷的情況，收到了良好的效果。基于SFC的T-SPOT.TB試驗結果清晰，易于判斷，大大提高了結核病診斷的陽性率，其檢測結果陰性對結核病的排除具有快速，穩定等特點，且具有良好的敏感性和特異性，對于肺外結核病與其他疾病的鑒別診斷具有十分重要的意義。

　　T-SPOT.TB檢測亦存在一些缺點以及亟待解決的問題，如檢測步驟復雜、對操作人員的技術及實驗室條件要求相當高、儀器及試劑的價格高昂等，這使得T-SPOT.TB檢測僅在一些發達國家及醫療、生活水平相對較高的國家及地區開展，許多低收入的結核病流行國家卻無法普及。本研究的不足是病人數量有限，樣本量較小，一定程度影響了結果的精確性。

　　參考文獻:

　　1. 人類免疫缺陷病毒感染者CD4+T淋巴細胞計數與結核分枝桿菌共感染的相關性，中華傳染病雜志2012年第6期，張馨?，蔣為民等

　　2. 《全國第五次結核病流行病學現場調查》，衛生部疾病預防控制局，2011年3月23日，郝陽。

　　3. 血清學診斷方法及T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用，中華臨床感染病雜志2013年2月第6卷第1期，13-17頁，王森，陳嘉臻等。

　　4. 以T- SPOT.TB 檢測為依據的結核病人密接者感染狀況及影響因素研究。現代預防醫學2013 年第40 卷第3 期，568-570頁，路麗蘋， 洪建軍， 金曉萍， 沈紅英。